Contrairement aux autres techniques d'imagerie optique de super-résolution, qui améliorent la résolution par le développement des microscopes eux-même, la microscopie d’expansion (ExM) consiste à agrandir physiquement l’échantillon de 4 à 10 fois, de façon isotrope et dans les 3 dimensions au moyen d’un hydrogel « gonflable ». Ainsi, cette technique permet d’acquérir facilement des images en super-résolution, 3D, multicolores, avec des fluorophores conventionnels (protéines fluorescentes et les colorants organiques) avec des microscopes à champ large. En outre, il est possible de coupler l'ExM aux techniques instrumentales de super-résolution pour améliorer plus encore la résolution finale. Nous avons optimisé l'ExM pour étudier la nanostructure et l'organisation des membranes mitochondriales et du cytosquelette et développé un protocole permettant l’ExM sur la levure bourgeonnante S. cerevisiae. Au cours de cet atelier, nous décrirons les trucs et astuces que nous avons developpé pour adapter l’ExM à l'étude des interactions entre les mitochondries et d'autres compartiments membranaires de la cellule tels que le reticulum endoplasmique, les peroxisomes et les lysosomes ainsi que des composants du cytosquelette (actine et microtubules). Nous nous concentrerons sur l'optimisation de l'utilisation des sondes vitales fluorescentes pour marquer de façon simple et efficace les compartiments cellulaires d'intérêt. Nous verrons quelles sont les prérequis à l'utilisation de ces sondes en ExM (famille de fluorophores, résistance à la polymérisation, ancrage au gel). Les participants seront amenés à effectuer eux même les expériences pour les étapes critiques : polymérisation de gels de différentes compositions, comparaison de différents fluorophores, manipulation, montage et imagerie de l'hydrogel expansé. À la fin de cet atelier, les participants seront en mesure de reproduire facilement les protocoles et de l'adapter à leur propre thématique.