En microscopie de fluorescence à haute résolution 3D, les techniques numériques jouent un rôle crucial, que ce soit pour la déconvolution, la microscopie à illumination structurée (SIM) ou la microscopie par localisation de molécules (SMLM). Tous ces problèmes de reconstruction/restauration computationnelle nécessitent une très bonne connaissance de la réponse du système qui est principalement encodée dans la fonction d’étalement du point (i.e. point-spread function PSF). En effet, il est essentiel d’être en mesure d’obtenir une bonne estimation de la PSF afin d’assurer une reconstruction fidèle à l'échantillon observé. En pratique, il y a deux écoles: ceux qui font confiance à une PSF théorique calculée à partir des paramètres optiques, et ceux qui préfèrent une PSF expérimentale estimée à partir d’acquisitions de microbilles fluorescentes. Dans ce contexte, cet atelier a pour objectif de présenter aux participants l’importance de la PSF pour les algorithmes de reconstruction, les différentes façons d’obtenir des PSF, et les difficultés liées à cette estimation. Les participants seront formés à l’utilisation d’outils open-source (sous-forme de plugins ImageJ) leur permettant de réaliser cette tâche.